使用方法
人视网膜微血管内皮细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈内皮细胞样，在普诺赛技术部
标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养
瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变
圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5
mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰
箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培
养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因
没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml
），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
注意事项
培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和普诺赛技
术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详
尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
该细胞只可用于科研。
