细胞描述：Vero细胞株是日本千叶大学的YasumuraY和KawakitaY从正常成年非洲绿猴的肾脏组织中分离建立的。该细胞常作为转染宿主，用于支原体的检测，也可用于多种病毒的基础研究。

货号：TC0399

细胞特性

1） 来源：肾

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x106  细胞数

4） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装

5） 用途：仅供科研使用。

运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收 到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存 管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25 瓶复苏的存活 细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h ，若发 现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10× , 20     ×)各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）半贴细胞或贴壁不牢（悬浮）细胞：T25 瓶置于 37℃培养箱中约 2-3h ，显微 镜下观察细胞的情况，若细胞密度在 60%以下，客户需收集 T25 瓶中的悬浮细胞 离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长 70%-90%     对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说 明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1：2 传代。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

（1）培养基：MEM +10%FBS+1%P/S

（2）培养条件：空气 95％，二氧化碳 5％；37℃培养

（3）冻存液：基础培养基+8%DMSO+20%FBS

二．细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 完  全培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min ，弃去上清液， 完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8mL 完全培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达 80%-90% ，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

①待细胞密度达到 80%~90%时，即可进行传代培养。

②弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次，吸净残余的 PBS 。 ③加入 0.25％（w / v ）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL ，T75   瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化 时间），显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。 迅速拿回操作台，加入 2 倍体积的、含 10%FBS 的培养基终止消化。

④轻轻打匀后吸出，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 离心 3-5min，弃去 上清液。

⑤向细胞沉淀中加入 1~2mL 完全培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按 1： 1 比例均匀铺于 2 个新的培养瓶/皿中，添加 6~8mL 完全培养基，置于 37℃恒温 细胞培养箱中培养。后续传代根据实际情况按 1:2~1 :5 的比例进行。

三，细胞冻存:

①细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计 数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×10^6~1× 10^7 个活细胞/ml。

②1000rpm 离心 3-5min ，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每 1ml 冻存液含 1×10^6~1×10^7 个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存 管中，标注好名称、代数、 日期等信息

③将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中 储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

建议：收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

注意事项：

1.  所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作， 并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2.  建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻 存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导 致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。